恒遠(yuǎn)科普:為什么一定要挑取單克隆?

恒遠(yuǎn)科普:為什么一定要挑取單克隆?
  當(dāng)從甘油保存的細(xì)菌或者穿刺菌中復(fù)蘇細(xì)菌時，從瓊脂板上挑取單菌落再液體培養(yǎng)顯得尤為重要。
  為什么呢？由于甘油菌或穿刺菌中的大多數(shù)細(xì)菌細(xì)胞在遺傳上應(yīng)該是相同的，但是偶然情況下，會存在個別隱藏的突變細(xì)菌。如果你只是簡單的從混合菌落中挑選了一團(tuán)細(xì)菌，然后在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，那么突變的細(xì)菌就有可能會接管整個培養(yǎng)物，從而影響您的實驗。我們可以通過劃線挑選單個菌落的方式來解決問題。在這種情況下，每個單獨(dú)的菌落就是單克隆，即它們在遺傳學(xué)上是相同的。使用這些單克隆菌落形成的液體培養(yǎng)物，將會獲得預(yù)期的質(zhì)粒產(chǎn)率并在后期試驗中獲得更一致的結(jié)果。
劃線前需要準(zhǔn)備哪些材料？
正式開始培養(yǎng)前，我們需要收集一些必要的材料。
首先是含有你感興趣質(zhì)粒的甘油菌或穿刺菌；
其次是含有合適抗生素的LB瓊脂平板；
無菌的牙簽或者無菌的接種環(huán)；
酒精燈或其他火焰；
30或37攝氏度的干燥培養(yǎng)箱；
zui后是良好的無菌操作技術(shù)。
劃線培養(yǎng)的方法是什么？
   首先，我們?nèi)〕龊羞m當(dāng)抗生素的LB瓊脂平板，確保平板上沒有污染并且干燥。如果平板上有水珠，你可以把它打開然后放在火焰下約10分鐘來風(fēng)干。接下來，我們要看一下我們的穿刺菌，確保其中有可見的細(xì)菌生長。然后取一個無菌的牙簽，把它插入并接觸到有細(xì)菌生長的穿刺區(qū)域，這個過程也可以是將無菌的牙簽浸入到半融化的甘油菌當(dāng)中。請注意的是，在牙簽上你不需要看到肉眼可見的一團(tuán)細(xì)菌，看起來很干凈的牙簽表面可能已經(jīng)被細(xì)菌充分覆蓋了。
    用牙簽輕輕地從平板的邊緣附近開始劃線，牙簽與平板接觸角度大概在45度左右。請注意一定要輕輕的劃線，不要用牙簽刺破平板，否則你就會在劃線過程中將瓊脂翹起來。在劃線時要遵循一定的路徑，并且需在每個新路徑開始時用一根新的無菌牙簽。用*根牙簽劃線時，我們需要輕輕地連續(xù)劃線大約至1/3平板大小，并注意避免碰到平板的邊緣。扔掉*根牙簽，并轉(zhuǎn)動平板，然后使用一根新無菌牙簽從上一次結(jié)束的地方開始連續(xù)劃線約 1/3區(qū)域，并在靠近邊緣的地方結(jié)束。zui后，我們用第三根牙簽再重復(fù)一次這一過程。盡管，這個過程會很快，我們?nèi)孕枰芗?xì)心。
   需要確保在培養(yǎng)之前平板是*干燥的。這是由于，如果細(xì)菌在平板上是一層液體的話，它們有可能會在平板上擴(kuò)散并形成一層菌群而不是單個的菌落。需要注意的是，要將平板倒置放入培養(yǎng)箱中，以避免冷凝的液體會滴到菌落上而干擾它們的生長。現(xiàn)在我們已經(jīng)完成了劃線，我們將平板倒置放入培養(yǎng)箱中過夜或者至少培養(yǎng)12小時。您就看到精心劃線后會有單個菌落出現(xiàn)，之后就可以挑取單個菌落以便用于下游各種各樣的實驗。