邊緣效應的定義是酶標板孔內中心部分與酶標板孔內遠離中心部分之間相比存在明顯的信號差異，一般歸因于兩個主要因素。
孵育環境確實對實驗有影響嗎？
是的。孵育時溫度不均會引起邊緣效應。請嚴格按照推薦的溫度進行孵育。如果條件允許，可以在能夠控溫的孵育器中進行孵育。
在使用之前將所有試劑平衡至室溫。（除非特別說明）
在實驗開始之前檢查工作的環境溫度。如果曲線很平直，可能是由于工作環境溫度低于氣溫所致。
在孵育末期我注意到蓋板一側突起來了，這是否會影響我的實驗結果？
蓋板如果使用不恰當會導致邊緣效應。
使用96孔板的ELISA測定中，常發現有“邊緣效應”，即外周孔顯色較中心孔深。經研究證實在溫育中的熱力學梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體，在實驗室的常規ELISA測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）置于37℃溫箱，板也升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加熱至溫育溫度（如37℃），就可以很容易地排除“邊緣效應”，并且可提高測定的重復性。
Elisa試劑盒還有就是在試驗中，必定有運用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺出和發生氣泡。ELISA試劑盒太快的話無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區，易致使非特異吸附。濺出會對附近孔發生污染。出現氣泡則反響液界面有區別。所以，有時分一份標本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯所造成的。
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