脂肪酶活性測定方法

方法：

1、粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸餾水溶解并定容至100 mL， 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

2、實驗設(shè)計

本實驗以10 mL色拉油為底物，以酶用量、水解溫度、反應(yīng)時間為因素，通過酸價的測定選定其水解的*條件。

3、酸價的測定

酸價是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù)， 它用于衡量油脂的水解程度。實驗中用酸堿滴定法測定水解液的酸價， 參照文獻[ 3， 4 ]中所使用的方法， 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液， 搖勻， 終止反應(yīng)， 并加入2滴酚酞指示劑， 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色， 在30 s內(nèi)不消失為終點， 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)（V ） 。用同樣的方法測定空白值， 每個試驗重復(fù)兩次， 以平均值作為測定結(jié)果。

酸價按下式計算：
X = C （V - V0 ） ×40 /M
式中: X —油脂酸價（mgNaOH /g油）
C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/L）
M —試樣的質(zhì)量（ g）
40—NaOH的mmol質(zhì)量（mg/mmol）

4 粗脂肪酶活力的測定

在*水解條件下， 分別測得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價X1、X2 ， 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力， 其中U1為粗脂肪酶活力， U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力。

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