Elisa法中血清標(biāo)本的處理保存意見

Elisa法中血清標(biāo)本的處理保存意見


酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中血清的具體處理保存意見，請(qǐng)跟隨小編一起了解下：


?(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
(3)血清標(biāo)本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。

Elisa技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)，并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑（如SPA、凝集素等）的作用，發(fā)展成為許多新方法。此外，發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手。這是因?yàn)椋?，用于Elisa技術(shù)的酶其種類遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測(cè)指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣，有希望開發(fā)很多類型的酶用于Elisa，并建立相應(yīng)的Elisa方法。相反，自然界的化學(xué)元素是有限的，放射性同位素的種類更加有限。第二，由于酶的多樣性，酶作用底物也有多種多樣，與此相對(duì)應(yīng)的生色源或供氫體的種類也有遠(yuǎn)大的開發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?br>