如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是由于標(biāo)本類型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗(yàn)者需要在推薦濃度周圍進(jìn)行多個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)zui合適的稀釋比例。
如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Useatanassaydependentdilution"，就需要做大量的預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索zui合適的比例了。未純化的抗體一般在說明書中不會標(biāo)明抗體的濃度，因?yàn)榇蟛糠秩寡濉⑴囵B(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標(biāo)明其中特異性抗體的濃度，實(shí)驗(yàn)者可以參考下表中“估計(jì)濃度"確定各種實(shí)驗(yàn)稀釋比例。
一般來說，抗體說明書都會提供一個(gè)稀釋度范圍，但是，有些公司生產(chǎn)的抗體，其說明書上沒有提供抗體稀釋度。這是可以理解的，因?yàn)槿绻f明書上標(biāo)明的抗體稀釋度如果高的話，就說明這種抗體效價(jià)不高，質(zhì)量不好。為此，實(shí)驗(yàn)者可以先在網(wǎng)上搜索一些相關(guān)的文獻(xiàn)，文獻(xiàn)的方法與材料中一般會把抗體來源以及稀釋度都詳細(xì)的標(biāo)出的。但真正做實(shí)驗(yàn)時(shí)，還是要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)樣品的情況和檢測指標(biāo)表達(dá)的豐富程度等因素先摸索一下抗體的稀釋度的。
所以在做預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，就采用倍比稀釋法，先做一個(gè)梯度，比如1：100，1：200，1：400，1：800，1：1600. 看看在這幾個(gè)梯度范圍內(nèi)，樣品中的目的蛋白的表達(dá)情況，然后再從中確定你認(rèn)為的稀釋度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，這樣做比較好一些。由于標(biāo)本類型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。
一抗稀釋液一般為PBS/0.4% Triton X-100/1%BSA。
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