上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司不僅從事酶聯(lián)免疫試劑盒的研究與開(kāi)發(fā)，我司對(duì)免疫組化也涉及其中，并且多次試驗(yàn)，累計(jì)了很多今年經(jīng)驗(yàn)，本章小編就技術(shù)文章中為大家具體分析關(guān)于免疫組化操作中，遇到的問(wèn)題及解決辦法，歡迎閱讀賞析。
問(wèn)答一：染色過(guò)強(qiáng)
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過(guò)高或孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗體滴度、抗體孵育時(shí)間：室溫1小時(shí)或4度過(guò)一夜
b 孵育溫度過(guò)高超過(guò)37度 一般在室溫20-28度
c DAB顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不超過(guò)5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)
問(wèn)答二：非特異性背景染色
原因及相關(guān)解決方法
a 操作過(guò)程中沖洗不充分： 每步?jīng)_洗3次每次5分鐘
b 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 ：可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時(shí)間延長(zhǎng)
c 組織中含內(nèi)原性生物素：正常非免疫動(dòng)物血清再封閉
d 血清蛋白封閉不充分：延長(zhǎng)血清蛋白封閉時(shí)間
問(wèn)答三：”染色弱
原因及相關(guān)解決方法
a 抗體濃度過(guò)低、孵育時(shí)間過(guò)短：提高抗體濃度、孵育時(shí)間不能少 于60分鐘
b 試劑超過(guò)有效使用時(shí)間： 應(yīng)更換試劑
c 操作中添加試劑時(shí)緩沖液未瀝干 ：每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
使試劑稀釋 （應(yīng)防止切片干燥）
d 室溫太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4 度冰箱過(guò)一夜
e 蛋白封閉過(guò)度：封閉不要超過(guò)12分鐘
問(wèn)答四：染色陰性
原因及相關(guān)解決方法
a 操作步驟錯(cuò)誤：應(yīng)重試設(shè)陽(yáng)性對(duì)照
b 組織中無(wú)抗原：設(shè)陽(yáng)性對(duì)照以驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果
c 一抗與二抗種屬連接錯(cuò)誤：仔細(xì)確定一抗二抗種屬無(wú)誤
以上問(wèn)答都是我司在實(shí)際操作過(guò)程中所遇到的的實(shí)際問(wèn)題解答，確保實(shí)驗(yàn)順利，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司竭誠(chéng)為您提供服務(wù)。
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