絞股藍(lán)總皂苷對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠 Treg/Th17 免疫功能的影響
阮丹，雷婧(杭州市第三人民醫(yī)院，杭州 310000) 

摘要：目的 研究絞股藍(lán)總皂苷對(duì)非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)大鼠肝臟保護(hù)作用及免疫調(diào)節(jié)作用機(jī)制。方法 48 只 SD 大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，多烯磷脂酰膽堿膠囊組(陽性對(duì)照組，150 mg·kg?1)及絞股藍(lán)總皂苷高、中、低(240，120，60 mg·kg-1)劑量組，除正常對(duì)照組外，其余各組連續(xù)飼喂高脂飼料 10 周，制備NAFLD 模型；模型成功后，各組連續(xù)給藥 8 周。實(shí)驗(yàn)期間，分別于給藥 0，4，8 周眼眶取血檢測血清 AST、ALT；末次給藥后，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血 Th17 和 Treg 細(xì)胞含量；酶聯(lián)免疫法檢測血清 IL-17、IL-10 及 TNF-α 含量。HE染色檢查肝組織病理變化和免疫組化法檢查肝組織 IL-17 和 Foxp3 表達(dá)。結(jié)果 給藥 4 周，絞股藍(lán)總皂苷高劑量顯著降低大鼠血清 ALT、AST(P<0.01)；給藥 8 周，絞股藍(lán)總皂苷各劑量均能顯著降低血清 ALT、AST(P<0.05，0.01)。絞股藍(lán)總皂苷高、中劑量能改善肝組織病變，降低 TNF-α 水平；高劑量顯著降低 IL-17、升高 IL-10 水平(P<0.05，0.01)，降低淋巴細(xì)胞 IL-17 含量，升高 CD4+CD25+Treg 含量(P<0.05)，明顯減少炎癥因子 IL-17 的表達(dá)和增加 Foxp3 表達(dá)。

結(jié)論 絞股藍(lán)總皂苷能改善 NAFLD 大鼠肝臟病變，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)肝臟 Treg/Th17 細(xì)胞平衡，減少促炎癥因子和增加抗炎因子產(chǎn)生相關(guān)。
關(guān)鍵詞：絞股藍(lán)總皂苷；非酒精性脂肪肝；Treg/Th17 細(xì)胞；炎癥因子
中圖分類號(hào)：R965.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1007-7693(2017)12-1683-06 

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征，是脂肪肝主要類型。NAFLD 在我國患病率高達(dá) 15%[1]；范圍的患病率高達(dá) 12.9~46%[2]。NAFLD 的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素作用的復(fù)雜過程，除涉及脂質(zhì)過氧化、線粒體功能障礙、炎性反應(yīng)因子失平衡、天然免疫等外，NAFLD 發(fā)病過程還存在免疫功能失衡，表現(xiàn)為調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞(Treg)和輔助性 T 細(xì)胞 17(Th17)數(shù)目和功能的異常[3-4]。
絞股藍(lán)總皂苷是絞股藍(lán) (Gynostemma pentaphyllum)主要有效成分群，含有 80 余種達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜類人參皂苷類成分。絞股藍(lán)總皂苷具有降脂保肝、降血糖、降血壓、增強(qiáng)免疫力等藥理作用[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)，絞股藍(lán)總皂苷能夠調(diào)節(jié)機(jī)體 T 淋巴細(xì)胞亞群失調(diào)[7]；抑制 NAFLD 肝病大鼠肝臟脂肪變[8]。然而絞股藍(lán)總皂苷是否可通過免疫調(diào)節(jié)防治 NAFLD 及具體機(jī)制并不清楚。本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼料誘導(dǎo) NAFLD 大鼠模型，探討絞股藍(lán)總皂苷通過影響 Treg/Th17 細(xì)胞免疫功能，并從調(diào)節(jié)促/抗炎因子平衡途徑研究其防治 NAFLD 的作用機(jī)制。
1 動(dòng)物與試劑
1.1 動(dòng)物及其飼料
48 只清潔級(jí) SD 大鼠，♂，體質(zhì)量 180~220 g，許可證號(hào) SCXK(浙)20080033，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)
院動(dòng)物中心提供。高脂飼料含普通飼料 75%、豬油 12%、膽固醇 2%、膽鹽 1%、蛋黃粉 10%，購
于南通特洛菲飼料科技有限公司，批號(hào)為TP28708U。
1.2 藥物
絞股藍(lán)總皂苷(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào)：ZL20160321RJ，含量：80%)。多烯磷脂酰膽堿膠囊(賽諾菲，批號(hào)：4JD036，規(guī)格：每粒228 mg)。
1.3 試劑
CD4-FITC(貨號(hào)：11-0040-81)、CD25-PE(貨號(hào)：12-0390-80)及 IL-17-PE(貨號(hào)：12-7177-81)流式試劑均購于 eBioscience 公司。白細(xì)胞介素 10(IL-10，批號(hào)：20161030)、白細(xì)胞介素 17(IL-17，批號(hào)：20161015) 及腫瘤壞死因子 -α(TNF-α ，批號(hào)：20160928)酶聯(lián)免疫試劑盒購于上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司。IL-17(抗兔，貨號(hào)：ab91649)和 Foxp3(抗小鼠，貨號(hào)：ab22510)購于 abcam 科技有限公司。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT，批號(hào)：16092401)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST，批號(hào)：16092401)試劑盒均購于寧波美康生物科技股份有限公司。蘇木素-伊紅染液(H&E，南京建成科技有限公司，批號(hào)：20160806)。

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